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      小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA檢測試劑盒操作注意事項

      發布時間:2023-10-25   點擊次數:21次

      小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA檢測試劑盒操作注意事項


      樣品收集、處理及保存方法

      1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

      2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

      3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

      4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

      5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      自備物品

      1.     酶標儀(450nm

      2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      3.     37恒溫箱

      操作注意事項

      1.  試劑盒保存在2-8,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶溶解后再使用。

      2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

      3.  預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。

      4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

      5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

      試劑盒組成

      名稱

      96孔配置

      48孔配置

      備注

      微孔酶標板

      12孔×8

      12孔×4

      標準品

      0.3mL

      0.3mL

      樣本稀釋液

      6mL

      3mL

      檢測抗體-HRP

      10mL

      5mL

      20×洗滌緩沖液

      25mL

      15mL

      按說明書進行稀釋

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      終止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2

      2

      說明書

      1

      1

      自封袋

      1

      1

      注:標準品濃度依次為:160、80、40、20、10、0 ng/mL.

      試劑的準備

       20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

      洗板方法

      1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

      2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

      操作步驟

      1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

      2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

      3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

      4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

      5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

      6.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。

      7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。


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