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      兔抗綿羊紅細胞(溶血素)的使用介紹

      發布時間:2023-10-27   點擊次數:12次

      兔抗綿羊紅細胞(溶血素)的使用介紹


      利用綿羊細胞與相應抗體(溶血素)結合成的復合物,可激活血清中的補體,導致紅細胞溶解,當紅細胞和溶血素量一定時,在規定反應的時間內,溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血(CH50)時,二者之間近似直線關系,故以50%溶血作為最敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的最小補體量為一個 CH50U,可計算出待測血清中總的補體溶血活性,以 CH50U /ml表示。

      產品全稱:凍干兔抗綿羊紅細胞(凍干溶血素)

      規格:0.5ml*10支

      效價:1:4000

      批號:20230511

      保存:-20℃,避光保存,避免反復凍融

      有效期:12個月

      使用方法:臨用前,每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用(10小時內),不得反復使用。

      相關實驗測定步驟:(僅供參考)

      本試驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能,其結果與補體C1~C9各組成分的量及活性均有關。

      1.試劑及配制

      (1)緩-沖生理鹽水:

      ①貯存液:

      Na2HPO4·12H20   2.85g

      KH2PO4               0.27g (加蒸餾水至100毫升,4℃保存)

      NaCl                    17.00g

      ②應用液(緩沖液):5毫升貯存液加95毫升蒸餾水,再加10%硫-酸鎂0.1毫升。當日配制。12小時內使用。

      (2)2%綿羊紅細胞:無菌采取綿羊血液,于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液

      洗3次,并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。

      (3)溶血素:將本品(效價1:4000),用緩沖液做1:2000倍稀釋(即1ml溶血素加1999毫升緩沖液)。

      (4)待測血清:新鮮血液室溫放置30分鐘,再4℃放置60分鐘,收縮。4℃離心

      (3000r/min )10分鐘,取上清,-20℃保存。

      2.試管法操作步驟(改良 Mayer 法)

      (1)致敏羊紅細胞:2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素(1:2000),混勻,置37℃水浴30分鐘。

      (2)稀釋血清:待測血清0.2ml,加緩沖液3.8ml,稀釋度為1:20。

      (3)配制溶血標準管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水,混勻,即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1,即為50%溶血管。

      (4)按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。


                   補體 CH50 測定試管法

       

      成分

      試管號

      1

      2

      3

      4

      5

      6

      7

      8

      9

      10

      1:20待測血清

      0.10

      0.15

      0.20

      0.25

      0.30

      0.35

      0.40

      0.45

      0.50

      -

      緩沖液(ml

      1.40

      1.35

      1.30

      1.25

      1.20

      1.15

      1.10

      1.05

      1.00

      1.50

      致敏紅細胞(ml

      1

      1

      1

      1

      1

      1

      1

      1

      1

      1










      結果測定:取出試管,2000r/min 離心10分鐘,對照管應不溶血。肉眼比色,選與

      50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長542nm、0.5cm比色杯)OD 值,確定與標準管接近者為終點管,然后按下公式計算CH50值:血清補體CH50 ( U /ml)=(1/血清用量)x 稀釋度。

      如第5管為終點管,測待測血清中 CH50為66.7U/ml 。血清補體CH50正常值為50-100U/ ml 。


      兔抗.png


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